PNGase F (with His-tag)

PNGase F (with His-tag)

REF: AS050147-AS050148

储运条件

-20℃

产品组成

产品简介

PNGase F（肽 N- 糖苷酶 F）来源于 Elizabethkingiamiricola， 是一种高效的酰胺水解酶，可以裂解由天冬酰胺连接的高甘露糖、杂 合和复杂的寡糖糖蛋白。 PNGase F 的切割位点为糖蛋白内侧 N- 乙 酰葡萄糖胺（GlcNAc）和天冬酰氨残基之间的酰胺键，同时将酶解 后蛋白上的天冬氨酰转化为天冬氨酸。

本产品通过大肠杆菌重组表达，  带有 His 标签，  含有 50% 甘油， 常应用于抗体及其相关蛋白去糖基化。

酶活单位定义

1 个酶活力单位 (U) 指在 10  μl 反应体系中，  37℃下反应  1 h 从 10 μg 变性 RNase B 中除去超过 95% 碳水化合物所需要的酶量。

失活条件

75℃温育 10 min。

质量控制

蛋白纯度检测

使用 SDS-PAGE 凝胶电泳检测，蛋白纯度不低于 95%。

糖苷酶与蛋白酶活性检测

无可检出的内切糖苷酶 F1、F2 或 F3 活性；无可检出的蛋白酶活性。

使用方法

1. 变性条件下去糖基化

① 将 1~20 μg 糖蛋白，   1 μl  10× Denaturing Buffer 和 ddH2O （如 有必要）混合至总体积 10 μl；

注： 10 × Denaturing Buffer 在低温储存时可能出现白色沉淀， 使用前可先在 37℃下温育使其溶解。

② 100℃反应 10 min 使糖蛋白变性后，冰上冷却，离心 10 s；

③ 加入 2 μl  10× PNGase F Buffer，2 μl 10% NP-40 ，补充 ddH2O 使总反应体积为 20 μl；

④ 加入 1~2 μl PNGase F，轻轻混匀，  37℃孵育 1~3 h。

2. 非变性条件下去糖基化

① 将 1~20 μg 糖蛋白，  2  μl  10× PNGase F Buffer 和 ddH2O （如 有必要）混合至总体积 20 μl；

② 加入 2~5 μl PNGase F, 轻轻混匀；

③ 37℃ 孵育 4~24 h。

PNGase F 的去除

本产品带有 His 标签，反应后可选择与目标糖蛋白不同的标签， 通过亲和层析将 PNGase F 去除。