UltraBio™ 哺乳动物活性蛋白抽提试剂

哺乳动物活性蛋白抽提试剂

Mammalian Active Protein Extraction Reagent

M751612-100ml

100ml

BioReagent

≥99%(SDS-PAGE)

阿拉丁生产的 UltraBio™哺乳动物活性蛋白抽提试剂 (UltraBio™ Mammalian Active Protein Extraction Reagent) 是一种用于快速、高质量、高产量、高活性提取哺乳动物细胞或组织的细胞浆蛋白、细胞核蛋白以及膜蛋白的活性蛋白抽提试剂。本产品是一种含有特定的经过精心筛选以确保蛋白抽提效果良好的比较温和的非变性去垢剂(detergent)的缓冲液(pH7.6)，既确保了蛋白能被高效抽提，抽提效果强，又能确保提取获得的蛋白样品中蛋白或酶的活性能被很好地保留，便于进行后续的蛋白活性分析检测。由于本产品能确保提取的蛋白样品的活性，所含的去垢剂比较温和，虽然对于膜蛋白也有很好的抽提效果，但对于一些难溶性蛋白的抽提效率相对较低。如果希望获得比较高的难溶性蛋白的得率，建议使用含有强去垢剂的适当抽提试剂。对于使用本产品抽提获得的蛋白溶液，如果希望去除其中的去垢剂，可以通过透析或超滤方法去除。本产品能够快速、温和、有效地抽提哺乳动物细胞或组织的总蛋白，抽提的蛋白能较好地保持其原有的空间结构和生物学活性，可用于多种生物化学和细胞生物学用途。例如，免疫印迹(Western blot)、免疫沉淀(Immunoprecipitation)、免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation)和 ELISA (Enzyme linked immunosorbent assay)等常规生化分析，luciferase、β-gal、alkaline phosphatase、chloramphenicol acetyltransferase (CAT)等报告基因(Report gene)酶活性检测，PKA、PKC和酪氨酸激酶(tyrosine kinase)等蛋白激酶活力的检测，以及带有 HA、Flag、Myc、V5、His 和 GST 等标签蛋白的分离纯化等方面的用途。 产品应用： 本产品能够快速、温和、有效地抽提哺乳动物细胞或组织的总蛋白，抽提的蛋白能较好地保持其原有的空间结构和生物学活性，可用于多种生物化学和细胞生物学用途。 产品优势： 本产品能够快速、高质量、高产量、高活性提取哺乳动物细胞或组织的细胞浆蛋白、细胞核蛋白以及膜蛋白的活性蛋白抽提试剂。 使用说明： 1.溶液的准备。 取适量的 UltraBio™哺乳动物活性蛋白抽提试剂，根据具体实验目的加入适量的蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物 (P752091)，也可以根据实验目的选不含磷酸酶抑制剂的蛋白酶抑制剂混合物 (P775091)。放置于冰浴备用。如有必要，可以考虑选购重组全能核酸酶 (O775185)，并添加到本产品中使最终浓度为 50U/ml 以降低抽提产物的粘稠度。 2.贴壁细胞的蛋白抽提。 a.洗涤细胞(可选做)：吸除细胞培养液，加入适量 PBS，轻轻摇动，吸除 PBS。注意：可根据具体情况，选择洗涤与否。如果培养液和培养液中添加的药物不会影响后续的实验，可以不进行细胞洗涤。如果影响比较大，就需要再重复洗涤一次。 b.裂解细胞：吸净细胞培养液或洗涤液，加入适量的 UltraBio™哺乳动物活性蛋白抽提试剂，冰上孵育 2-10min，具体用量参照表 1。加入抽提试剂后会发现，细胞接触抽提试剂后会立即发生裂解。根据不同的细胞类型和实验目的，可以随即进入后续步骤，或者在冰上继续孵育 2-20min (如有必要也可以在摇床上冰浴以进一步改善抽提效果)，以让细胞充分裂解。对于常规的检测，抽提试剂加入后无需额外的孵育，如果希望获得更多的蛋白，或者对于一些较难裂解提取的蛋白，则需要额外的孵育时间以提高得率。额外的孵育时间，可能会增加 10-50%不等的蛋白得率，不同的细胞会有所不同。 表一: 不同规格的细胞培养器皿中哺乳动物活性蛋白抽提试剂的用量表。 Multiple Well Plates or Dishes