pCMV-GFP-LC3B

载体pCMV-GFP

pCMV-GFP-LC3B

P748882-1μg

1μg

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-20℃保存。

pCMV-GFP-LC3B是阿拉丁自行研发的在哺乳动物细胞中表达GFP标签的人源LC3B 融合蛋白的质粒。该质粒含有CMV启动子，为卡那霉素抗性，转染细胞后能够在靶细胞中高效表达绿色荧光蛋白GFP标签的LC3B的融合蛋白，呈现明亮的绿色荧光，可以用于细胞自噬(autophagy)的研究。本质粒转染细胞后，可以使用G418筛选稳定表达融合蛋白的细胞株。LC3是酵母自噬关键蛋白ATG8在哺乳动物中的同源蛋白。LC3最初被分析鉴定为microtubule-associated protein 1 light chain 3 (MAP1LC3)。LC3蛋白家族包括LC3A、B、C和GABARAP等亚家族，其中对于LC3B的研究最为广泛。到目前为止，LC3B被认为是细胞自噬信号通路最为关键的标志性蛋白。LC3B是一个具有125个氨基酸残基的蛋白，在蛋白合成后，被Atg4所酶切而失去了C端的22个氨基酸蛋白，从而暴露出C端的甘氨酸，人们把它命名为胞质形式的LC3B I。在细胞自噬的过程中，其C端暴露的甘氨酸经过一个类似泛素化的过程，以ATG7为E1样激活酶，以ATG3为E2样连接酶，以Atg12-Atg5-Atg16复合物为E3样连接酶，在C端甘氨酸上共价连接上磷脂酰乙醇胺(phosphatidylethanolamine, PE)而成为LC3B-PE即LC3B II。与胞质定位的LC3B I不同，LC3B II定位于自噬体(autophagosome)的内膜和外膜上。在自噬体与溶酶体融合后，自噬体外膜上的LC3B II被Atg4所酶切，而自噬体内膜上的LC3B II则被溶酶体内的蛋白酶所降解。尽管LC3B II比LC3B I的分子量要大，但由于其极强的疏水性，在SDS-PAGE电泳时，LC3B II比LC3B I迁移得更快，其表观分子量分别为14kD和16kD。在用pCMV-GFP-LC3B转染细胞后，在非自噬的情况下，荧光显微镜下GFP-LC3B以弥散的形式存在于细胞质中；而在自噬的情况下，荧光显微镜下GFP-LC3B则聚集在自噬体膜上，以斑点的形式表现出来(LC3B dots or punctae)。自噬(Autophagy)是一种在进化上高度保守的通过溶酶体吞噬并降解部分自身组分的细胞内分解代谢途径。自噬与多种生理功能有关，在饥饿等不利的环境条件下，细胞通过自噬降解多余或异常的细胞内组分，为细胞的生存提供能量及原材料，促进生物体的生长发育、细胞分化及对环境变化产生应答。自噬异常与多种病理过程如肿瘤、神经退行性疾病、代谢疾病、病原体感染等都有密切关系。由于细胞自噬在生理和病理过程中都有重要作用，自噬已经成为细胞生物学领域的一个新的研究热点。pCMV-GFP-LC3B质粒的主要信息如下：,pCMV-GFP-LC3B质粒(5402bp)的图谱如下： pCMV-GFP-LC3B中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-GFP-LC3B)包括： pCMV-GFP-LC3B中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-GFP-LC3B once)包括： pCMV-GFP-LC3B质粒中推荐使用的测序引物序列如下：T3 primer (620-639): 5′-AATTAACCCTCACTAAAGGG-3′T7 primer (1904-1925): 5′-GTAATACGACTCACTATAGGGC-3′pCMV-GFP-LC3B的全序列信息请参考阿拉丁网站上该质粒的信息。 注意事项 ： 本质粒未经阿拉丁书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。'], 使用说明 ： 1.首次使用1μg包装的本产品时，请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。2.100µg包装的本产品质粒浓度为0.1µg/µl，共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。