牛痘病毒加帽酶

V406454-500U

500U

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产品基本信息 来源：携带牛痘病毒加帽酶基因的E.coli 反应条件：1x Capping Buffer (50 mM Tnis-HC1, pH 8.0; 5 mM KC1; 1 mMMgaly; 1 mM DTT). 37℃孵有 储存缓冲液：20mM Tnis-HC1 pH8.0;100mMNaC1; 1mM DTT; 0.1mMEDIA;0.1%TritonX-100;50% (wv) Glycerol 体外转录获得的mRNA未经细胞内一系列修饰，不具备Cap 结构与PolyA 尾，容易降解，易激活免疫反应，不能与核糖体起始蛋白结合，无法启动蛋白翻译，因而在工业化mRNA生产中，需使用牛痘病毒加帽酶对IVT 的mRNA进行加帽修饰，使mRNA的5' 端获得Cap0 结构，进一步使用2'-O- 甲基转移酶将Cap0 转化为Cap1。酶法加帽引入的帽结构与真核生物体内天然帽结构完全一致，从根本上降低外源mRNA 免疫原性的同时，保护其不被降解，并提高翻译效率，增加细胞内蛋白产量。通过酶法加帽最大可获得100%的加帽效率，而通过化学合成帽类似物结构加帽，其加帽效率相对较低，并且帽类似物结构与天然帽结构有差异。 牛痘病毒加帽酶将 7-甲基鸟苷帽结构（m7Gppp，Cap0）加到 RNA 的 5´ 末端。在真核生物中，该结构与 mRNA 的稳定、转运和翻译密切相关。通过酶促反应为 RNA 加帽是一种简单有效的方法，能显著改善用于体外转录、转染和显微注射的RNA的稳定性和翻译能力。这种酶由两个亚基（D1 和 D12）组成 （图 1a），D1 亚基执行 RNA 三磷酸酶和鸟苷转移酶的功能，D12亚基执行鸟嘌呤甲基转移酶的功能，它们对于添加一个完整的 Cap0 结构 m7Gppp5´N 都是必须的（图 1b）。 本制品可用于 T7 RNA Polymerase, GMP Grade（GMP-E121，Novoprotein）反应产生的 RNA 的加帽反应，加帽反应在一小时之内完成，效率接近 100%，并且保证正确的方向。 重组牛痘病毒加帽酶利用大肠杆菌大规模发酵表达，采用药用规格原辅料生产，并严格控制宿主蛋白质残留、核酸残留等，符合 GMP 规范的产品生产与质量管理规程保障生产过程及所有原辅料可追溯。 图1. 牛痘病毒加帽的结构和作用机理。a. 牛痘病毒加帽酶和 GTP（红色）、SAH（玫红）的共结晶结构 (PDB 4CKB) 。该酶由 D1 和 D12 两个亚基组成，兼具 RNA 三磷酸酶（蓝色）、鸟苷转移酶（橙色）和鸟嘌呤甲基转移酶（米黄色）的功能。本图引自 Ramanathan, A., Robb, G. B., & Chan, S. H. (2016). mRNA capping: biological functions and applications. Nucleic Acids Res 44(16), 7511–7526. b. mRNA 的帽结构是由一个7-甲基鸟苷通过一个 5′–5′三磷酸酯桥连接到 mRNA 链的 5′核苷上组成。Cap-0 结构由相邻的 RNA 链通过三种酶的依次反应形成。进一步形成 cap-1 结构需要 2-O 甲基转移酶的参与，该修饰可以降低RNA 在体内引起的细胞先天免疫反应。本图引自 Decroly, E., Ferron, F., Lescar, J. et al. (2012). Conventional and unconventional mechanisms for capping viral mRNA. Nat Rev Microbiol 10, 51–65。 质量要求 项目